熒光是生物和分析顯微鏡中最常用的物理現(xiàn)象之一,主要是因?yàn)樗哂徐`敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。熒光是冷發(fā)光的一種形式。熒光顯微鏡甚至允許用戶決定單個(gè)分子種類的分布、數(shù)量及其在細(xì)胞內(nèi)的位置。可以實(shí)現(xiàn)共區(qū)域化和相互作用的研究,離子濃度以及觀察細(xì)胞內(nèi)間的胞吞和胞吐過(guò)程。借助超分辨率熒光顯微鏡,甚至可以成像亞分辨率結(jié)構(gòu)。而在熒光分析中常用汞燈作激發(fā)光源,根據(jù)汞蒸氣壓的不同可分為以下幾種:
一、低壓汞燈:汞蒸氣,可發(fā)射出很強(qiáng)波長(zhǎng)的射線,壽命很長(zhǎng),可長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)工作,射線對(duì)眼睛有害,不眼睛時(shí)不可長(zhǎng)時(shí)間注視。二、高壓汞燈:高壓汞燈又叫高強(qiáng)度紫外線燈,汞蒸氣為1-數(shù)個(gè)大氣壓,可見(jiàn)炮區(qū)的譜線增強(qiáng),在紫外光區(qū),波長(zhǎng)為365nm的光線最強(qiáng)。三、中壓汞燈:可以發(fā)射一系列汞線組成的不連續(xù)光譜,除254nm波長(zhǎng)以外,多數(shù)譜線都可作為校正波長(zhǎng)使用。此外,還有超高壓汞燈、汞-氙燈、汞-鋅燈等。

四、氫灑和氘燈:是燈泡中加氫蒸氣,經(jīng)閉合放電產(chǎn)生160-350nm波長(zhǎng)的光,氫朋激發(fā)態(tài)返回的基態(tài)時(shí),就發(fā)射了氫的連續(xù)光譜,在160nm以下為線樂(lè)譜,氫燈和氘燈性能相同,其壽命也比氫燈長(zhǎng),因玻璃吸收紫外線,故燈殼要用石英制作,或在燈泡出光處開(kāi)一石英窗,此光源適用于紫外光區(qū)的測(cè)定。五、氙燈:光的輻射能強(qiáng)度很高,它可在220-1100nm之間發(fā)射很強(qiáng)的連續(xù)光譜,可用于紫外區(qū),可見(jiàn)光及近紅外區(qū)的測(cè)定,雖其輻射范圍廣,使用中在生產(chǎn)高熱的同晨有臭氧味,其壽命短,燈泡內(nèi)壓較大,如日立牌650-60型熒光分光光度計(jì),氙燈平時(shí)約有7個(gè)大氣壓,點(diǎn)燃后可達(dá)30個(gè)大氣壓,故使用進(jìn)應(yīng)注意。

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