暗視野顯微鏡是利用丁達爾效應的一種檢測設備，當一束光線透過黑暗的房間，從垂直于入射光的方向可以觀察到空氣里出現的一條光亮的灰塵“通路”，無物體時，視野暗黑不可能觀察到任何物體，而當有物體時，以物體衍射回的光與散射光等在暗的背景中明亮可見。因此暗視野顯微鏡使用方法也與普通顯微鏡使用方式不同。

基于暗視野顯微鏡的原理開發的顯微鏡在操作時，選厚薄在1.0~1.2 mm 的干凈載玻片一塊，滴上釀酒酵母懸液，加蓋玻片調節聚光鏡光圈，直到光源的光圈孔調至最大。在聚光器上放一大滴香柏油，將標本置載物臺上，旋上聚光器使油與載玻片接觸（不能有氣泡發生）。在將制作好的細菌懸滴標本片置于載物臺上，上升聚光器至頂部使油與載玻片接觸。

然后暗視野顯微鏡的放大光源，進行聚光器光軸調節及調焦。用10倍的物鏡找到被檢物像，關小聚光器虹彩光圈至可在視野中看到視場光闌的輪廓，再上下緩慢調整聚光器，這樣會使視場光闌的像變得清晰，如視場光闌不在場中央，利用聚光器外側 的兩個調節鈕進行調整，當亮光點調到場中央后，再將其開大，即可進行觀察。

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